產(chǎn)品描述
　　PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個高度敏感的基于熒光技術定量純化蛋白質的試劑盒，其檢測蛋白濃度范圍為0.1~10 μg/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質定量測定技術相比具有更好的的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質之間的小變異性，且熒光信號穩(wěn)定長達16 h；其受測樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。需特別注意的是，PikoOrange對鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學物質都有不同程度的耐受性（表1）。
產(chǎn)品信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存
常溫運輸。組分A常溫保存；組分B常溫避光保存；組分C  4℃ 保存。有效期36個月。
【注】：如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。
使用方法

1. 制備1X PikoOrange緩沖液：將PikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide) 按1:10 用dH₂O稀釋。例如，添加1 mL 10X 緩沖液至9 mL dH₂O。PikoOrange緩沖液可以儲存在室溫下。

2. 制備1X PikoOrange工作液：將PikoOrange dye, 200X in DMSO 按1:200用1X PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加25 μL 200X PikoOrange染料至5 mL 1X PikoOrange緩沖液。【注】：您將需要大約3 mL工作液制作標準曲線（見表2)以及每孔檢測樣品250 μL工作液。

3. 準備未知樣本：10 μL 樣本添加 250 μL 1X PikoOrange工作液。【注】：您可能需要稀釋未知樣本以得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會減少干擾物質的影響。

4. 準備一個蛋白質標準曲線所需的BSA濃度，如表2所示。

5. 樣本和標準蛋白加熱至90~ 95℃ 10分鐘，此過程需避光操作。

6. 取出樣本室溫避光放置20 min冷卻。短時間離心收集全部樣本。

7. 每個標準樣品或未知樣品取200 μL轉移到96孔酶標板，熒光酶標儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長為480/598 nm。
   【注】：樣品可以被轉移到熒光試管使用熒光儀測量。如果需要超過200 μL體積測量，等比例放大配置方案。
   
   表1：PikoOrange對不同化學物質的耐受性

表2：準備BSA樣品制作標準曲線

	BSA體積		工作液體積	BSA 終濃度（μg/mL）
A	5 μL BSA std (2 mg/mL)		995 μL	10
B	250 μL solution A		250 μL	5
C	250 μL solution B		250 μL	2.5
D	200 μL solution C		300 μL	1
E	250 μL solution D		250 μL	0.5
F	250 μL solution E		250 μL	0.25
G	100 μL solution F		150 μL	0.1
H	0 μL solution G		250 μL	0
圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性

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