DNA電泳套裝的基本技術(shù)

更新時(shí)間：2017-11-06

點(diǎn)擊次數(shù)：1539

DNA電泳套裝電壓和溫度,電泳時(shí)電場(chǎng)強(qiáng)度不應(yīng)該超過20V/cm，電泳溫度應(yīng)該低于30℃，對(duì)于巨大的DNA電泳，溫度應(yīng)該低于15℃。注意如果電泳時(shí)電壓和溫度過高，可能導(dǎo)致出現(xiàn)條帶模糊和不規(guī)則的DNA帶遷移的現(xiàn)象。特別是電壓太大可能導(dǎo)致小片段跑出膠而出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象.DNA樣品的純度和狀態(tài),注意樣品中含鹽量太高和含雜質(zhì)蛋白均可以產(chǎn)生條帶模糊和條帶缺失的現(xiàn)象。乙醇沉淀可以去除多余的鹽，用酚可以去除蛋白。注意變性的DNA樣品可能導(dǎo)致條帶模糊和缺失，也可能出現(xiàn)不規(guī)則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對(duì)DNA樣品加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。

DNA電泳套裝方法,一般的核酸檢測(cè)只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要分辨率高的電泳，特別是只有幾個(gè)bp的差別應(yīng)該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應(yīng)該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導(dǎo)致缺帶.凝膠濃度,對(duì)于瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進(jìn)行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進(jìn)行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用質(zhì)量好的瓊脂糖是解決辦法。注意高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨，造成條帶缺失現(xiàn)象。

DNA電泳套裝是基因工程中zui基本的技術(shù),DNA制備及濃度測(cè)定、目的DNA片段的分離，重組子的酶切鑒定等都需要電泳完成。根據(jù)分離DNA大小及類型的不同，DNA電泳可分為以下兩種,聚丙烯酰胺凝膠電泳適合分離1kb以下的片段，zui高分辨率可達(dá)1bp，也用于分離寡核苷酸，在引物的純化中也常用此種方法進(jìn)行純化,也稱PAGE純.瓊脂糖凝膠電泳,可分離的DNA片段大小因凝膠濃度不同而異,膠濃度為0.5~0.6%的凝膠可以分離的DNA片段范圍為20bp~50kb.電泳結(jié)果用溴化乙錠（EB）染色后可直接在紫外下觀察.并且可觀察的DNA條帶濃度為納克級(jí),而且整個(gè)過程一般1小時(shí)即可完成,由于該方法操作簡(jiǎn)單快捷,在基因工程中較為常用.